Kháng nấm là gì? Các công bố khoa học về Kháng nấm

Chúng tôi đã xây dựng và kiểm nghiệm một mô-đun kháng sinh ưu thế, để lựa chọn các biến đổi gen của S. cerevisiae, hoàn toàn bao gồm DNA dị loại. Mô-đun kanMX này chứa khung đọc mở kanr đã biết của yếu tố di chuyển Tn903 từ E. coli kết hợp với các chuỗi điều khiển phiên mã và dịch mã của gene TEF từ nấm sợi Ashbya gossypii. Mô-đun lai này cho phép lựa chọn hiệu quả các biến đổi gen kháng lại geneticin (G418). Chúng tôi cũng đã xây dựng một mô-đun báo cáo lacZMT trong đó khung đọc mở của gene E. coli lacZ (thiếu 9 mã đầu tiên) được liên kết tại đầu 3′ với đoạn kết thúc S. cerevisiae ADH1. Mô-đun kanMX và mô-đun lacZMT, hoặc cả hai mô-đun cùng nhau, đã được nhân bản vào trung tâm của một chuỗi nhân bản đa dạng mới gồm 18 vị trí hạn chế duy nhất được bao bọc bởi các vị trí Not I. Sử dụng mô-đun kép cho việc xây dựng các sự thay thế trong khung của gene, chỉ cần một thí nghiệm biến đổi để kiểm nghiệm hoạt động của bộ khởi động và tìm kiếm các kiểu hình do việc bất hoạt gene này gây ra. Để cho phép việc sử dụng lặp lại sự lựa chọn G418, một số mô-đun kanMX được viền bằng các nhặp lại trực tiếp dài 470 bp, thúc đẩy việc loại ra in vivo với tần số từ 10–3 đến 10–4. Mô-đun kanMX dài 1,4 kb cũng đã được chứng minh là rất hữu ích cho các sự gián đoạn gene dựa trên PCR. Trong một thí nghiệm mà sự gián đoạn gene đã được thực hiện với các phân tử DNA mang theo các chuỗi kết thúc được thêm vào từ PCR chỉ có 35 baz đôi tương đồng với từng vị trí mục tiêu, tất cả mười hai thuộc địa kháng geneticin được kiểm tra đều mang mô-đun kanMX tích hợp đúng."

Tỉnh Bắc KwaZulu/Natal (KZN) của Nam Phi nằm giáp Mozambique ở phía nam, giữa Swaziland và Ấn Độ Dương. Để kiểm soát các vector gây bệnh sốt rét tại KZN, các ngôi nhà được phun hàng năm với DDT tồn dư 2 g/m² cho đến năm 1996 khi việc xử lý chuyển sang deltamethrin 20–25 mg/m². Tại Ndumu (27°02′ S, 32°19′ E), tỷ lệ bệnh sốt rét được ghi nhận đã tăng gấp sáu lần từ 1995 đến 1999. Các khảo sát Entomological cuối năm 1999 phát hiện nhóm muỗi Anopheles funestus (Diptera: Culicidae) trú trong các ngôi nhà đã phun ở một số khu vực của Ndumu. Loài vector rất nội trú này đã bị loại khỏi Nam Phi bởi phun DDT trong những năm 1950, khiến An. arabiensis Patton, ít nội trú hơn, trở thành vector quan trọng duy nhất tại KZN. Các ngôi nhà được phun deltamethrin tại Ndumu đã được kiểm tra tính hiệu quả của thuốc diệt côn trùng bằng phương pháp sinh học với An. arabiensis dễ nhiễm bệnh (được nuôi tại phòng thí nghiệm) và cho thấy tỷ lệ chết 100%. Các thành viên của nhóm An. funestus từ các ngôi nhà ở Ndumu (29 con đực, 116 con cái) đã được xác định bằng phương pháp rDNA PCR và phát hiện có bốn loài: 74 An. funestus Giles sensu stricto, 34 An. parensis Gillies, bảy An. rivulorum Leeson và một An. leesoni Evans. Trong số các con cái An. funestus s.s., 5,4% (4/74) dương tính với Plasmodium falciparum qua các xét nghiệm ELISA và PCR. Để kiểm tra kháng pyrethroid, những con muỗi trưởng thành được tiếp xúc với liều phân biệt permethrin và tỷ lệ tử vong được ghi chép 24 giờ sau khi tiếp xúc: tỷ lệ sống sót của đực mạnh bắt tự nhiên là 5/10 An. funestus, 1/9 An. rivulorum và 0/2 An. parensis; tỷ lệ sống sót của thế hệ trưởng thành nuôi từ 19 con cái An. funestus trong phòng thí nghiệm trung bình 14% (sau 1 giờ tiếp xúc với 1% permethrin 25 : 75 cis : trans trên giấy trong bộ thử nghiệm WHO) và 27% (sau 30 phút trong chai chứa 25 μg permethrin 40 : 60 cis : trans). Những Anopheles funestus có tỷ lệ sống sót > 20% trong hai phương pháp thử nghiệm khả năng kháng này gồm 5/19 và 12/19. Thế hệ từ 15 gia đình được thử nghiệm trên giấy tẩm DDT 4% và cho kết quả tử vong 100%. Việc phát hiện tỷ lệ kháng pyrethroid này, gắn liền với sự gia tăng bệnh sốt rét tại Ndumu, có ý nghĩa nghiêm trọng đối với hoạt động kiểm soát vector truyền bệnh sốt rét ở miền nam châu Phi.

Rapamycin, một loại kháng sinh chống nấm mới, được phát hiện là có khả năng ức chế phản ứng miễn dịch ở chuột đồng. Nó hoàn toàn ngăn chặn sự phát triển của hai bệnh lý miễn dịch thí nghiệm (viêm não tủy dị ứng thí nghiệm (EAE) và viêm khớp bổ trợ (AA)) và sự hình thành kháng thể thể dịch (giống IgE). Nó mạnh bằng khoảng một nửa so với cyclophosphamide trong việc ức chế EAE. Trong trường hợp AA và sự hình thành kháng thể, rapamycin và cyclophosphamide có độ mạnh tương đương, trong khi methotrexate lại mạnh hơn. Hoạt tính ức chế miễn dịch của rapamycin có vẻ liên quan đến việc ức chế hệ bạch huyết.

Đánh giá độc lực của Cryptococcus neoformans trên một số vật chủ không phải động vật có vú cho thấy C. neoformans là một tác nhân gây bệnh không đặc hiệu. Chúng tôi sử dụng việc tiêu diệt sâu bướm Galleria mellonella (bướm sáp lớn hơn) bởi C. neoformans để phát triển một hệ thống mô hình vật chủ không xương sống có thể được sử dụng để nghiên cứu độc lực của nấm Cryptococcus, đáp ứng miễn dịch của vật chủ đối với nhiễm trùng và hiệu quả của các hợp chất kháng nấm. Tất cả các dạng của C. neoformans đã tiêu diệt G. mellonella. Sau khi tiêm vào xoang cánh của côn trùng, C. neoformans phát triển một cách nhanh chóng và, dù đã bị thực bào thành công bởi tế bào máu của vật chủ, đã giết chết sâu bướm ở cả 37°C và 30°C. Tỷ lệ và mức độ tiêu diệt phụ thuộc vào chủng Cryptococcus và số lượng tế bào nấm được tiêm vào. Chủng lâm sàng H99 của C. neoformans đã được giải trình tự là chủng nguy hiểm nhất trong số các chủng được thử nghiệm và tiêu diệt sâu bướm với liều tiêm thấp như 20 CFU/sâu bướm. Một số gen C. neoformans trước đây được cho là có liên quan đến độc lực ở động vật có vú (CAP59, GPA1, RAS1 và PKA1) cũng đóng vai trò trong việc giết chết G. mellonella. Liệu pháp kết hợp kháng nấm (amphotericin B cộng với flucytosine) được sử dụng trước hoặc sau khi tiêm đã hiệu quả hơn so với đơn trị liệu trong việc kéo dài sự sống và giảm tải lượng nấm Cryptococcus trong xoang cánh. Mô hình gây bệnh G. mellonella-C. neoformans có thể là một sự thay thế cho các mô hình động vật có vú về nhiễm trùng với C. neoformans và có thể tạo điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu độc lực nấm và hiệu quả của các liệu pháp kháng nấm trong thực nghiệm.

Tài liệu dược lý biển đã được đánh giá đồng nghiệp từ năm 2009 đến 2011 được trình bày trong bài tổng quan này, theo định dạng đã sử dụng trong các bài tổng quan giai đoạn 1998–2008. Dược lý của các hợp chất có cấu trúc đã được đặc trưng, được tách ra từ động vật biển, tảo, nấm và vi khuẩn, được thảo luận một cách tổng quát. Các hoạt động dược lý kháng khuẩn, chống nấm, chống động vật nguyên sinh, chống lao và chống virus đã được báo cáo cho 102 sản phẩm tự nhiên từ biển. Thêm vào đó, 60 hợp chất từ biển đã được ghi nhận có ảnh hưởng đến hệ miễn dịch và hệ thần kinh cũng như có tác dụng chống tiểu đường và chống viêm. Cuối cùng, 68 chuyển hóa từ biển cho thấy có khả năng tương tác với nhiều thụ thể và mục tiêu phân tử khác nhau, và do đó sẽ có khả năng đóng góp vào nhiều loại dược lý sau khi có thêm các nghiên cứu về cơ chế tác động. Dược lý biển trong giai đoạn 2009–2011 vẫn là một lĩnh vực toàn cầu, với các nhà nghiên cứu từ 35 quốc gia, và Hoa Kỳ, đã đóng góp cho dược lý tiền lâm sàng của 262 hợp chất biển, là một phần của quy trình dược phẩm tiền lâm sàng. Nghiên cứu dược lý tiếp tục với các sản phẩm tự nhiên từ biển sẽ góp phần nâng cao quy trình lâm sàng dược phẩm biển, mà vào năm 2013 bao gồm 17 sản phẩm tự nhiên từ biển, các dẫn xuất hoặc tương tự nhắm vào một số ít loại bệnh.

Các hoạt động in vitro của ravuconazole và voriconazole đã được so sánh với amphotericin B, flucytosine (5FC), itraconazole và fluconazole đối với 6,970 chủng Candida spp. thu được từ hơn 200 trung tâm y tế trên toàn thế giới. Cả ravuconazole và voriconazole đều có hoạt tính rất mạnh đối với tất cả các loài Candida spp. (MIC mà 90% các chủng được thử nghiệm bị ức chế [MIC ₉₀ ], 0.25 μg/ml; 98% giá trị MIC đều ≤1 μg/ml); tuy nhiên, đã ghi nhận sự giảm hoạt tính của cả hai loại thuốc này đối với các chủng có tính nhạy cảm phụ thuộc vào liều (mic fluconazole, 16 đến 32 μg/ml) và kháng (MIC, ≥ 64 μg/ml) đối với fluconazole. Candida albicans là loài nhạy cảm nhất (MIC ₉₀ của cả ravuconazole và voriconazole là 0.03 μg/ml), và C. glabrata là loài ít nhạy cảm nhất (MIC ₉₀ , 1 đến 2 μg/ml). Ravuconazole và voriconazole mỗi loại đều có hoạt tính in vitro mạnh hơn amphotericin B, 5FC, itraconazole, và fluconazole đối với tất cả các loài Candida spp. và là các tác nhân duy nhất có hoạt tính in vitro tốt đối với C. krusei . Những kết quả này cung cấp thêm bằng chứng cho phổ hoạt tính và độ mạnh của ravuconazole và voriconazole đối với một bộ sưu tập lớn và đa dạng về địa lý của các loài Candida spp.

Phân loại phụ DNA bằng phương pháp điện di gel trường xung và kiểm tra tính nhạy cảm in vitro đã được sử dụng để nghiên cứu sự biến đổi chủng loại và độ kháng fluconazole trong các mẫu Candida albicans từ bệnh nhân bị AIDS đang điều trị azole (fluconazole và clotrimazole) cho bệnh nấm miệng. Tổng cộng có 29 bệnh nhân mắc 71 đợt nấm miệng. Nhìn chung, 121 mẫu C. albicans được thu thập trong quá trình điều trị từng nhiễm trùng đã sẵn sàng cho việc phân tích sâu hơn. Phân loại phụ DNA tiết lộ tổng cộng 61 loại phụ DNA khác nhau. Kiểm tra tính nhạy cảm in vitro của 121 mẫu bằng cách sử dụng các phương pháp tiêu chuẩn được đề xuất của Ủy ban Tiêu chuẩn Phòng thí nghiệm Lâm sàng Quốc gia cho thấy MIC của fluconazole dao động từ < hoặc = 0,125 đến > 64 microgram/ml. MIC cho 50% mẫu thử nghiệm là 0,25 microgram/ml, và MIC cho 90% mẫu thử nghiệm là 8,0 microgram/ml. MICs > hoặc = 64 microgram/ml chỉ có ở 7,4% mẫu thử nghiệm. Phần lớn (62%) bệnh nhân mắc nấm miệng và đang dùng azole bị nhiễm hoặc có nhiều hơn một loại phụ DNA, và việc xuất hiện hoặc chọn lọc những chủng có loại phụ DNA kháng cao hơn trong quá trình điều trị fluconazole không phải là hiếm. Ngoại trừ một trường hợp duy nhất, điều này dường như không có ảnh hưởng xấu đến kết quả lâm sàng. Ngược lại, đối với bệnh nhân AIDS và nấm miệng bị nhiễm một loại phụ DNA duy nhất của C. albicans, sự gia tăng MIC fluconazole cho chủng nhiễm bệnh chỉ là hiếm gặp trong suốt quá trình điều trị.